Tel：400-099-6011 0510-8240 0646
Email：jsbaihe@bahens.com
Add：江苏无锡市梁溪区广益路218号民航大厦510室
400-099-6011
摘要：本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪测定厄贝沙坦原料中叠氮类遗传毒性杂质AZBC的方法。AZBC在0.25ng/mL~25ng/mL浓度范围内线性良好，校准曲线线性相关系数r在0.999以上；对照品连续进样6次，保留时间和峰面积的RSD分别为0.04%和2.36%;低、中、高不同浓度的加标回收率在95.97%~100.55%之间。该方法专属性强、灵敏度高，稳定性好，结果准确，可用于厄贝沙坦原料中AZBC的检测。
厄贝沙坦是一种血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB),主要用于治疗成人原发性高血压，属于一线降压药，临床应用广泛。
2018年以来，缬沙坦、厄贝沙坦等沙坦类药物由于可能存在的氮亚硝胺类遗传毒性杂质，如NDMA、NDEA等被多次召回。近期，韩国生物医药评论KoreaBiomedical Review发布消息，赛诺菲-安万特韩国公司表示，由于其他国家提出的杂质问题，该公司将召回三种含有厄贝沙坦的高血压治疗药物。此次召回涉及的杂质是叠氮杂质。
2021年4月29日，EDQM宣布叠氮杂质是一种新的致突变物质，即遗传毒性杂质。叠氮化合物是医药行业中常见的化工原料，通常作为起始物料、反应试剂或中间体存在于药物合成过程中，如在厄贝沙坦叠氮基AZBC的合成中，通常需要使用三丁基叠氮化锡或叠氮化钠以形成药物结构中的四唑环。遗传毒性杂质叠氮化合物需依据ICH M7开展研究，并确保叠氮杂质水平低于毒理学关注阈值(TTC)的控制限度，确保药品质量安全。本文采用岛津LCMS-8050建立了厄贝沙坦原料中叠氮杂质4'-(叠氮甲基)[1,1-联苯]-2-氰基(AZBC)的方法，该方法灵敏、准确，供相关研究人员参考。
实验部分
1.1仪器
本实验采用岛津Nexera XR与三重四极杆质谱仪LCMS-8050联用系统。具体配置为：
系统控制器：CBM-20A
自动进样器：SIL-20ACXR
输液泵：LC-20ADXRx2
质谱仪：LCMS-8050
柱温箱：CTO-20AC
色谱工作站：LabSolutions Ver.5.99
在线脱气机：DGU-20AsR
1.2分析条件
液相条件
色谱柱：ACE Excel3C18(150 mmx4.6 mm1.D.,3μm)
流动相：A相-0.01 mol/L乙酸铵水溶液-乙腈(90:10),B相-乙腈
流速：0.5 mL/min
柱温：40℃
进样体积：10μL
自动进样器温度：10℃
洗脱方式：梯度洗脱，初始浓度为B相20%,时间程序见表1。
质谱条件
离子源：APCI,正离子模式
离子源接口电压：4.5 kV
雾化气：氮气2.0 L/min
干燥气：氮气9.0 L/min碰撞气：氩气(230 kPa)
DL管温度：200℃
加热模块温度：250℃
接口温度：450℃
扫描模式：多反应监测(MRM)
MRM参数：见表2
标准品溶液的配制极样品前处理
标准工作溶液配制：取AZBC对照品适量，精密称定，加80%乙腈溶解并定量稀释制成每1mL中含AZBC约为0.25、0.75、1.25、2.5、5.0、12.5、25ng的溶液。
供试品溶液：取厄贝沙坦原料约25 mg,精密称定，置50 mL量瓶中，加80%乙腈适量，超声溶解并加80%乙腈稀释至刻度，摇匀。
结果与讨论
3.1厄贝沙坦UV图及AZBC对照品溶液谱图
为避免厄贝沙坦污染离子源的风险，实验中建议配制紫外检测器进行色谱图的监控。根据色谱图中厄贝沙坦与AZBC保留时间的差异，将供试品中高浓度的厄贝沙坦切入废液。本实验中，厄贝沙坦与AZBC保留时间分别为5.850 min和9.242 min,二者之间的分离度良好。
3.2线性关系
将上述AZBC系列标准工作液按1.2中的分析条件进行测定，外标法定量。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制校准曲线如图4所示；所得校准曲线线性关系良好，线性方程为Y=(47795.95)X+(1131.704),相关系数R=0.9995,准确度在95.5~102.9%之间。
3.3精密度
对2.5 ng/mL的对照品溶液连续测定6次，考察仪器精密度。结果显示：AZBC色谱峰保留时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.04%和2.36%,仪器精密度良好。
3.4专属性
图5-7分别为空白溶液、供试品及供试品加标溶液的MRM色谱图，可见空白无干扰。供试品中AZBC未检出。
3.5根据检出限MDL=3S/N,定量限LOQ=10 S/N计算检出限和定量限，分别为0.02和0.06ng/mL。
3.6回收率
取厄贝沙坦样品9份按照2步骤进行前处理，分别加入低、中、高三种不同浓度的AZBC标准溶液，按照1.2中的分析条件测定加标回收率，每种浓度平行测定3次。AZBC的回收率在95.97%~100.55%之间，具体结果见表4。
结论
本文建立了使用岛津超高效液相色谱三重四极杆质谱联用仪LCMS-8050测定厄贝沙坦原料中叠氮基遗传毒性杂质AZBC的方法。AZBC在0.25 ng/mL~25 ng/mL浓度范围内线性关系良好，且专属性、精密度及不同浓度的加标回收率实验结果良好。该方法专属性强、灵敏度高、稳定性好结果准确，可用于厄贝沙坦原料中的AZBC检测。
免责声明：本文来自岛津官网，版权归原作者所有。所转载文章并不代表本网站赞同其观点和对其真实性负责。如涉及作品版权问题，请及时联系我们400-099-6011，我们将作删除处理以保证您的权益！
