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摘要:本文建立了人工牛黄中胆酸类含量测定的HPLC方法。参照《人工牛黄》公示稿方法,采用色谱柱ShimNex UP C18分析,系统适用性溶液中,4种胆酸峰形良好,牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度大于2.0,鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于1.5,且牛磺胆酸峰的理论塔板数远高于10000;对照品溶液中,牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸等6种胆酸峰形良好,且可完全分离,满足《人工牛黄》公示稿要求。此方法可为人工牛黄中胆酸类含量测定提供参考。
关键词:人工牛黄 胆酸类 ShimNex UP C18 HPLC
1. 实验部分
1.1 实验仪器及耗材
ShimadzuLC-40D XR 高效液相色谱仪;
色谱柱:ShimNex UP C18(5μm,4.6×250 mm;P/N:380-01231-49);
纯水机:PR-FP-0120α-MT1(+ 60L水箱 + 取水器);
SHIMSEN Arc Disc HPTFE针式过滤器(P/N:380-00341-05);
LC-MS认证样品瓶LabTotal Vial(P/N:227-34001-01);
SHIMSEN Pipet移液枪:SHIMSEN Pipet PMII-10(P/N:380-00751-02);
SHIMSEN Pipet PMII-100(P/N:380-00751-04);
SHIMSEN Pipet PMII-1000(P/N:380-00751-06)。
1.2 系统适用性溶液的制备
各取牛磺胆酸对照品、牛磺猪去氧胆酸对照品、鹅去氧胆酸对照品及去氧胆酸对照品适量,加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的溶液,作为系统适用性溶液。
1.3 对照品溶液的制备
取牛磺胆酸对照品、牛磺去氧胆酸对照品、甘氨胆酸对照品、甘氨去氧胆酸对照品、胆酸对照品、猪去氧胆酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含牛磺胆酸0.4mg、牛磺去氧胆酸0.2mg、甘 氨胆酸0.4mg、甘氨去氧胆酸0.2mg、胆酸0.5mg、猪去氧胆酸1mg的溶液,即得。
1.4 供试品溶液的制备
取本品约0.25g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇15mL,称重,超声处理30分钟,放冷,再称定重量,加甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
1.5 分析条件
色谱柱:ShimNex UP C18(5μm,4.6×250 mm;P/N:380-01231-49)
柱温:30℃
检测器:蒸发光散射检测器ELSD-III;Gain:5;漂移管温度50℃
流速:1.0 mL/min
进样量:5 µL
流动相:A:0.2%三氟乙酸水;B:乙腈
梯度条件:
2. 实验结果
按照上述色谱条件(1.5)进行采集,系统适用性溶液、对照品溶液和供试品溶液色谱图如下:
系统适用性溶液
对照品溶液
供试品溶液、对照品溶液和系统适用性溶液对比图
重现性
系统适用性溶液重现性
对照品溶液重现性
3. 结论
本文建立了人工牛黄中胆酸类含量测定的HPLC方法。参照《人工牛黄》公示稿方法,采用色谱柱ShimNex UP C18分析,系统适用性溶液中,4种胆酸峰形良好,牛磺胆酸与牛磺猪去氧胆酸的分离度大于2.0,鹅去氧胆酸与去氧胆酸的分离度大于1.5,且牛磺胆酸峰的理论塔板数远高于10000;对照品溶液中,牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、甘氨胆酸、甘氨去氧胆酸、胆酸、猪去氧胆酸等6种胆酸峰形良好,且可完全分离,满足《人工牛黄》公示稿要求。此方法可为人工牛黄中胆酸类含量测定提供参考。
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